重量级突破NatureMedici

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基于CRISPR/Cas9的疗法在遗传疾病的治疗方面具有相当大的前景，尤其是单基因突变。年12月10日，FDA批准了Spark公司AAV基因疗法，通过AAV病毒载体，将正确的RPE65基因递送到视网膜细胞，从而治疗Leber先天性黑蒙2型（Leber先天性黑蒙10型（LCA10）是一种常染色体隐性遗传病，由CEP基因中的双等位基因功能丧失突变引起。），该疗法售价高达85万美元/年。年1月23日，EditasMedicine公司（创始人为张锋）的MorganL.Maeder等人在顶级医学期刊NatureMedicine杂志发表题为：Developmentofagene-editingapproachtorestorevisionlossinLebercongenitalamaurosistype10的研究论文（点击阅读），该研究使用EditasMedicine公司开发的编号为EDIT-的CRISPR/Cas9基因疗法，该疗法巧妙地去除由CEP基因中的IVS26突变产生的异常剪接供体，从而恢复正常的CEP基因表达，成功恢复了Leber先天性黑蒙症10型的视力。这一成果也表明基于CRISPR的基因编辑疗法在治疗遗传疾病方面的可行性。

年2月19日，NatureMedicine再次聚焦医学领域，连续发表3篇文章关于CRISPR技术治疗遗传疾病：

西班牙奥维耶多大学的CarlosLópez-Otín及JoséM.P.Freije共同通讯发表题为“DevelopmentofaCRISPR/Cas9-basedtherapyforHutchinson–Gilfordprogeriasyndrome”的研究论文，该论文该方法通过在LMNA基因中引入移码突变来恢复Hutchinson-Gilford早衰综合征细胞和小鼠的几种改变，为Hutchinson-Gilford早衰综合征开发了基于CRISPR/Cas9的疗法；

美国加利福尼亚州Salk研究所Belmonte团队发表题为“Single-doseCRISPR–Cas9therapyextendslifespanofmicewithHutchinson–Gilfordprogeriasyndrome”的研究论文，该研究使用单剂量CRISPR-Cas9疗法延长了Hutchinson-Gilford早衰综合征小鼠的寿命；

美国杜克大学CharlesA.Gersbach团队发表题为“Long-termevaluationofAAV-CRISPRgenomeeditingforDuchennemusculardystrophy”的研究论文，该研究使用单次静脉腺相关病毒CRISPR（AAV-CRISPR），在Duchenne肌营养不良症的mdx小鼠模型中恢复了dystrophin表达，并持续了1年。有趣的是，当给予成年小鼠注射AAV-CRISPR时，小鼠对其具有免疫原性;然而，通过治疗新生小鼠可以避免体液和细胞免疫反应。该研究显示了AAV-CRISPR对永久性基因组校正的潜力，并突出了宿主反应的重要发现。尽管存在对Cas9的宿主反应和持续的非预期的基因组修饰，但AAV-CRISPR具有良好的1年耐受性且没有毒性迹象。此外，在此期间肌营养不良蛋白表达的恢复得以维持。在大型动物模型中表征安全性和效率，并减轻潜在免疫反应的新发展对于将该技术转化为治疗遗传性疾病至关重要。

总之，这些研究对于进一步推动CRISPR技术在临床上的应用，打下了扎实的基础，同时对于治疗Hutchinson-Gilford早衰综合征及Duchenne肌营养不良症点燃了希望。

Hutchinson–Gilford早衰综合征（HGPS）是一种罕见疾病，其特征是儿童期出现衰老样表现。大多数病例（80-90％）来自LMNA基因中的从头点突变，其激活外显子11中的隐蔽剪接位点（c.CT;p.GlyGly）。该事件导致progerin的表达，该蛋白具有50个氨基酸的内部缺失的截短的核纤层蛋白A变体，其保持法尼基化，诱导核包膜的形态学和功能性改变。

CRISPR-Cas9靶向破坏核纤层蛋白A和progerin

小鼠模型-LmnaGG/GG-概括了这些儿童的突变和许多临床特征，证实HGPS是由progerin积累引起的，而不是由正常的laminA损失引起的。在临床前模型中测试了几种针对该综合征的方法，包括法呢基转移酶抑制剂，其为HGPS患者提供临床益处。西班牙奥维耶多大学的CarlosLópez-Otín及JoséM.P.Freije等人基于CRISPR/Cas9的方法的功效，该方法通过在LMNA基因中引入移码突变来恢复Hutchinson-Gilford早衰综合征细胞和小鼠的几种改变。

CRISPR-Cas9诱导的核纤层蛋白A/progerin的减少，增强了小鼠健康状况并延长了HGPS小鼠的寿命

美国加利福尼亚州Salk研究所Belmonte团队数据显示，通过单次静脉注射，使用CRISPR-Cas9介导的方法，减少核纤层蛋白A/progerin的含量，这增强了小鼠的健康状况，并延长了HGPS小鼠的寿命。值得注意的是，CarlosLópez-Otín及JoséM.P.Freije等证实了腹腔内输送金黄色葡萄球菌Cas9和gRNAs，也得出了相似的介绍结论。因此，这两项独立研究是互补的，揭示了CRISPR-Cas9在治疗人类HGPS患者中的潜在用途。鉴于HGPS是一种致命的疾病，通过这种方法实现的健康改善和延长的寿命提供了一种有吸引力的干预模式。有趣的是，虽然研究人员观察到适度的治疗效果，但这一结果与基因编辑的发生有关。更广谱的靶向，包括结肠或法尼基转移酶抑制剂的联合治疗，可进一步延长患有HGPS的患者的预期寿命。

通过静脉内施用治疗的新生小鼠中基因组编辑持续1年

Duchenne肌营养不良症（DMD）是由DMD基因突变导致缺乏肌营养不良蛋白引起的衰弱和过早致命的遗传疾病。尽管最近的临床进展，仍然有待找到治疗方法。最近有一些关于Duchenne肌营养不良症临床前模型中基因组编辑的报道，然而，这些基因组编辑方法的长期持续性和安全性尚未得到解决。

体内基因组编辑产生多种靶向基因组修饰，包括AAV整合和异常剪接

美国杜克大学CharlesA.Gersbach团队使用单次静脉腺相关病毒CRISPR（AAV-CRISPR），在Duchenne肌营养不良症的mdx小鼠模型中恢复了dystrophin表达，并持续了1年。有趣的是，当给予成年小鼠注射AAV-CRISPR时，小鼠对其具有免疫原性;然而，通过治疗新生小鼠可以避免体液和细胞免疫反应。该研究显示了AAV-CRISPR对永久性基因组校正的潜力，并突出了宿主反应的重要发现。

AAV整合到Dmd基因座和全基因组

尽管存在对Cas9的宿主反应和持续的非预期的基因组修饰，但AAV-CRISPR具有良好的1年耐受性且没有毒性迹象。此外，在此期间肌营养不良蛋白表达的恢复得以维持。在大型动物模型中表征安全性和效率并减轻潜在免疫反应的新发展对于将该技术转化为治疗遗传性疾病至关重要。

总之，这些研究对于进一步推动CRISPR技术在临床上的应用，打下了扎实的基础，同时对于治疗Hutchinson-Gilford早衰综合征及Duchenne肌营养不良症点燃了希望。

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