治愈得上车CART一文读懂CR

CRISPR修饰CAR-T

当前最火的两个技术（CRISPR和CAR-T）联合起来会产生什么样的效果？不可否认的是，除了用于产生强大的研究工具或模型，CRISPR–Cas技术本身也具有发展成药物或疗法的巨大潜能，特别是在CAR-T的基因编辑方面。近几年，癌症免疫疗法领域快速发展，科学家们也迅速将基因编辑技术应用到其中。目前，有大量的研究集中在将这一技术应用到CAR-T疗法的开发中。本章将主要从通用型CAR-T和增强型CAR-T这两个方面讲解。

通用型CAR-T

首先让我们来聊聊通用型CAR-T。目前，市场上大部分的CAR-T细胞是利用患者自身的T细胞来生产的。这个过程不仅耗时耗力，价格昂贵，而且还受限于当前的生产制造能力。如果科学家们能够想办法生成通用型的CAR-T细胞，那这类疗法将有望变得更便捷、更便宜。因为，这些现成的（off-the-shelf）细胞将增加能够接受单一CAR-T细胞产品治疗的患者数量。

但有两个问题成为通用型CAR-T的主要障碍，移植物抗宿主病（graft-versus-hostdisease，GVHD）和宿主排斥。不过幸运的是，美国纪念斯隆凯特林癌症中心科学家领导的研究小组发现，同种异体供体CD19特异性的CAR-T细胞在杀伤肿瘤细胞的同时，所导致的GVHD发生的风险是最少的。文章发表在《NatureMedicine》上。

基于这样一个天然的优势，研究人员就想着利用CRISPR对CAR-T进行基因编辑，降低CAR-T的抗原性。CAR-T领域的先驱者CarlJune教授就在《ClinicalCancerResearch》杂志上发表文章证实，体外和动物模型研究中，用CIRSPR敲除TCR（Tcellreceptor）和B2M（β-2microglobulin）这两个和免疫排除有关的基因后，T细胞同种异体反应性（alloreactivity）降低，且没有导致GVHD。

无独有偶，中国和英国科学家也发现，用CRISPR敲除TRAC（Tcellreceptoralphaconstantchain）后可以构建的通用型CAR-T。

笔者在此还想补充的一点是，通用型CAR-T还有另外一种解读，就是同一种T细胞可以加载不同的抗原。这个概念是由MIT和波士顿大学的科学家提出来的。如下图所示，在T细胞上表达通用型的受体，然后这个通用型的受体可以连接不同的靶点抗原，开发出一种分离的、通用、可编程式CAR系统用于T细胞治疗，他们起名为SUPERCAR-T。也就是说，患有不同癌症的患者只需要输入同一种SUPERCAR-T，然后再输入相应的抗原（比如肺癌特异性抗原或者淋巴瘤特异性抗原等），这大大加快了治疗进程。

增强型CAR-T

CRISPR除了用于产生通用型CAR-T，还能通过敲除免疫共抑制通路或信号分子的基因（如CTLA4、PD1）提高CAR-T细胞的功效。比较有代表性的就是NIH（美国国立卫生研究院）下属Re